诛仙ＴｒＩＦＡ检测ＨＢＶ标志物与病毒载量的关系及临床意义
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本文作者： 郑红波， 王祥德， 朱训高
△缈：丝型芝盘．量三盟q盟型鲞链U到』凹趔业旦业，吐?I)l上j(一U2．3胰腺癌组和正常对照组各标志物阳性数及阳性率参考各指标诊断临界值。胰腺癌组和良性疾病组各标志物阳性数及阳性率如表2，卡方检验结果显示，胰腺癌组较良性疾病组显著性增高，差异具有统计学意义(P<0．OI)。襄2cAl9母，CA50、CAl25和cEA在两组的阳性散和阳性率【n【％)】‘与良性病组相比．P 根据临床检验诊断临界值，cAl9．9>35u／ⅡII、cA50>20U／ml、CAl25>35U／rnl和cEA>5ng／nll为阳性标准游戏，得出各指标的阳性率，统计结果显示，阳性率胰腺娟组较胰腺良性病组显著性增高(P 本文着重分析四种指标联检胰腺癌的新开传奇诊断性能，通过Logi8dc回归建立四指标诊断的回归模型，通过模型中的概率值来拟合ROC曲线，联检的曲线下面积为O．927，敏感性和特异性分别为94．3％和85．6％，曲线下面积和敏感性大于各标志物指标单独检测的结果，特异性降低，因此CAl9母、C”O、CAl25和cEA联检可明显提高胰腺癌诊断的灵敏度，有助于胰腺癌的早期诊断。参考文献[1]Gog画Ⅱ且M．Mol扰=Ill盯瑚Ikemof翻_Ilyp毗蛇把a6c伽。
叮[J]．J(ainotl甜，2005，23(20)：45244531．[2]刘汉起．肿瘤标志物c队、cAl9母、cA50在联合诊断胰腺癌中的价值[J]．临床和实验医学杂志．2∞8，7(7)：104．[3]wux。hlxH，xuT．EvaIu“on0fthedi哪。击cvalue0fB删tIlm盯m^^啪，肌d删k-Ⅲ|lldp53四∞eⅢ伽oImf曲畔枷ccan∞r[J]．chinJDigDi5，2∞6，7(3)：170·174．[4]H脚M，I舢beIId盯RP，铀cb口P．嘲I∞dc谳啊哪eofCAl9母，C队。CRP，^ndLDHkineti∞inp商eⅡ协h叫。d稍thp|Ⅱi“靶∞∞lId-lilleth喇lpy细矗如蚰cedpalI删6cc蚍阿[J]．T呦伽’Biol，20lo，3l(4)：351-357．[5]cba阳labop咖l∞K．KotBal∞A，B|旧BtII蛔lA．Semm觚dd唧c8cle．njuml胛el|iIIg谢c啪∞rpaii曲协andm舢∞WithcEA[J]．枷-∞nc口R月，2009，29(8)：3465．3467．[6]stE缸icD，彤。d嘲M．BaliM．op6mim6∞0fdi哪∞dcEusA·b刹胁f叮thedd优d硼of肌to．蛐在bodi髑^gain或tIlm叮枷gen8iⅡhuⅢ舢[J]．B∞nJB“cMedSci，2008。8(3)：245筠O．【7】Ⅸ叮吐eMs。PnIIIblIcci衄sE，cilhcB．Nectin4胛唧嘲Bi蛐iIIav“蛆c蚰c口d删∞and舢m：pot即叫mle柚-8emmbi珊诎呵[J】．AmJclinP虹bol，2010，134(5)：835jB45．[8]FbLc。M呲锄nllcrK，M且№rdleilI盯P．Mol∞ll新开传奇l盯叫IIk啊0fp蚰-口谢c咖唧：dcvcI叩m硎蛐dclilIicalTele啪∞[J】．L蚰群妇hhhsIl唱．2008．393(6)：883890．(20lO1022收稿．20lOlO一26修回)浙江省江山市人民医院(324100)郑红波王祥德朱训高酶联免疫吸附试验(EusA)是当今各临床实验室检测乙肝两对半的常用方法，以其简便、快速、特异及较高的灵敏度得到广泛应用，但与时间分辨免疫荧光技术(dme-瑚olvedi咖岫胡uo姗etric聃8ay。
TrIFA)相比灵敏度相对较低，对一一104一些临界浓度的弱阳性样本常常发生误判，将大、小三阳判为二阳，且EUSA一般只做定性测定．对患者的病情观察、疗效监测及预后评估存在一定的局限。
近年发展起来的TrIllA是一种特异性强、灵敏度高、稳定性好的先进技术，各方面都优于EusA。本文应用TrIFA定量检测乙肝血清学标志物(邶V．M)，同时采用实时荧光PcR检测乙肝病毒载量，以进一步探讨其临床应用价值。1材料和方法1．1资料来源来自本院住院及门诊2010年3月一20lO年8月的患者共166例(男99，女67)，平均年龄(37．3±10．3)岁。乙肝大三阳(HB8Ag、HBeAg、HBcAb阳性)62例，小三阳(HB8Ag、HBeAb、HBcAb阳性)104例。
所有病例诊断按2000年第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案标准执行。丝9』丝兰’差筮：基纠韭垫2曼一筐鼬I蛆Jj，tj鱼·Ii卫¨r一-y匕生，＆=三兰12血5ml，离心分离血清，3h内检测。1．3仪器试剂HBVM定量使用EF兀CUTA(AUTOMA一ⅡONSYSlEM)时间分辨仪，采用上海料波生物技术有限公司生产的乙肝两对半配套试剂，按说明书操作。当HBsAg>0．5形ml、HB8Ab>10mIU／ml、HBe舨>O．5PⅡU／ml、耶eAb>0．2PⅡU／“、HBcAb>0．9PEIu／d时结果报告为阳性HBV-DNA使用瑞士R0cHE公司生产的jjghtc忧lel．2荧光定量检测仪，用深圳匹基生物有限公司生产的HBV核酸扩增(P(=R)荧光定量检测试剂，灵敏度为5．O×102IU／ml。1．4统计学处理采用sPssll．5统计分析软件包进行处理，均值的比较用t检验，率的显著性差异用，Y2检验，以P<0．05视为差异有统计学意义。2结果2．1乙肝大、小三阳HBV．M及耶V．DNA定量结果，见表1．2标本采集采用一次性真空试管，清晨空腹采集静脉l。表l大、小三阳HBVM殛耶V．DNA定■结果比较(i±j)’PO．05(与小三阳组比较)2．2乙肝大、小三阳患者不同级别HBV-DNA载量构成比结果比较，见表2。邱V．DNA总体阳性率大三阳组为90．3％，小三阳组为47．1％。两组热血传奇具有显著性差异(P<0．01)。裹2不同级别瑚VDNA载■大、小三阳构成比结果比较‘P<0．Ol，AP>0．05，。P<0．05(与小三阳组比较)2．3166例乙肝大、小三阳HBVM与HBVDNA相关性分析：HB8Ag、HBeAg、HBeAb、HBcAb相关系数分别为O．3120、O．626、一0．513、一O．196。3讨论TrIFA系利用镧系元素(如Eu，+、n”、sm”等)螯合物标记抗原或抗体，并与时间分辨测定技术相结合建立起来的一种新型微量检测技术。因镧系元素螯合物具有荧光寿命较长，可有效地降低各种组织、蛋白及其它化合物所产生的非特异性短寿命荧光的本底干扰，同时又因stoK∞位移较大，可消除激发光引起的散射光的干扰。形成的Eu3+标记抗原抗体复合物在弱碱性溶液中荧光信号较弱，酸性增强液可使Eu“从复合物上完全解离，游离的EIl“与B．二酮体生成新的具有高强度荧光的稳定螯合物，信号增强达上百万倍，大大提高了检测的灵敏度，最小检出量可达lO“‘瑚L，L【“。此法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、易于自动化、能定量测定等多种优点。荧光定量聚合酶链反应(FQ-PcR)能直接检测乙肝患者血液中壬IBV的核酸含量，是反映HBV复制的客观指标，且敏感性高。本文结果显示，乙肝大三阳组衄V-DNA的阳性率达90．3％，与文献"1报告结果相近，约一成的大三阳患者HBV-DNA检测阴性，应考虑是否船V基因的S区发生有意义的点突变或插入、缺失突变所致而乙肝小三阳组HBV-DNA的阳性率为47．1％，较文献H1结果稍高，那样不公平可能系地区不同及我们使用的FQ-PcR试剂更敏感所致。大三阳组HBBAg及HBV．DNA两者定量均值明显高于乙肝小三阳组，且衄V-DNA定量值为107、106数量级的占61．2％，而乙肝小三阳组HBV．DNA定量值<10’数量级的占59．6％，两者存在极显著的统计学差异，说明乙肝大三阳患者乙肝病毒蛋白的合成水平较高，病毒复制活跃，传染性更强。同时观察到。大三阳组mkAg水平呈偏态分布，个体问差异较大，有的HBeAg含量很低甚至无法测出，但船V．DNA定量值很高，这可能是HBV前c区11862发生变异，致使HBeAg不表达。而邶V仍在复制【4J。因此，I玎eAb的出现说明体内免疫机制激活，使咖VDNA复制受到一定程度抑制，但不能作为HBVDNA停止复制的指标。HB8Ag、HBeAg含量与哪V-DNA载量呈正相关，且毗与HBV-DNA的相关系数较高，这是由于HBV复制时，编码c蛋白的3．5l西mI州A同样也是子代病毒DNA的模板，而s蛋白则由2．1labmRNA编码，故胁eAg同病毒的消长更为一致，同HBV．DNA复制的关系更为密切。此外，在肝组织中整合的舳V大多有基因组的缺失，而保留最多的则是X基因和S基因，可完整的表达或截短X蛋白或S蛋白H】，合成和分泌仅含有珊sAg的网游病毒外壳，使得部分HBV感染者虽无病毒复制，但可长期产生HB8Ag，从而降低了其与HBV-DNA的相关性。TrIFA可精确地估计HBV．M的含量，而FQ-H讯则可直接检测乙肝病毒感染者血清中HBV．DNA载景．二者结合，可丝2』丝垒尘挝蔓】U_三Lmt替礁i型j』I型尘唧叫”蹦艘l墨i12更全面地了解HBV感染者的病毒复制状态、eAg／e址的动态消长过程，更有利于患者的病情监测及疗效的判断，参考文献[1]罗开忠。杨旭，苏先狮，等．时间分辨免疫荧光法检测己型肝炎病毒标志物[J】．中华肝脏病杂志，2003，11(9)：569．[2]王兰兰，吴健民．临床免疫学与检验[M]．第1版．北京：人民卫生出版社，2007，髓_91．一105一[3]俞安清，陈效琴，苏III『萍，等．实时荧光PcR检测乙肝病毒DNA的临床意义[J】．中国临床实f{j医学，2010，4(1)：88jB9．【4]undhM．s且vageK，R∞8J，eIa1．HBeAgi胁吼叫丑ining0flm6明ueinvariou88t噼B0fchmnichep撕tisB[J]．uv盱，1999，19(4)：294．298．[5]Go锄扯ikD，Mumk姗iY，s丑i90K，et81．Id舶ti6cati明ofhu咖啪cer·地kedgen∞by舶lllral】y∞cIIllingh叩“fiBB咖DNAt丑舀咖g[J]．O∞o酽凹，2001．20(43)：6233_6240．(2010一12一12收稿)尿脱氧吡啶啉(DPD)对恶性肿瘤骨转移的临床价值△徐州医学院附属医院(221000)李智勇1李兴华1张敬川2侯先存1任少阳1季雪静1骨转移是一些恶性肿瘤常见的并发症，特别是前列腺癌、乳腺癌、肺癌。对骨转移早期诊断而进行的早期治疗不仅有利于防止骨痛、骨折等病理性改变，而且能够明显延长病人的寿命，因此，早期诊断骨转移非常重要。放射性核素骨扫描在诊断和随访骨转移中起到重要作用旧J。
但是骨扫描对早期骨转移不敏感，而且，骨扫描价格昂贵、费时。不能及时反映骨骼的变化状况【”。尿脱氧吡啶啉(Deoxyp严idirIobe。DPD)是近年发现的能反映骨骼病变的骨代谢标志物，有较好的敏感性和特异性。本文对恶性肿瘤骨转移阳性及骨转移阴性患者的尿DPD进行了比较，并对尿DPD增高患者进行了追踪观察。以探讨尿DPD在诊断恶性肿瘤早期骨转移中的价值。
1材料和方法1．1临床资料研究人群包括从2006年7月一2010年3月来我院就诊的各类肿瘤患者150例，年龄(3288)岁，所有肿瘤患者均经细胞学及组织学证实。患者骨转移状况通过‰Tc．亚甲基二磷酸盐放射性核索骨扫描来评价，其中骨转移阳性者68例，骨转移阴性者82例，正常对照组48例，为本院健康体检者。有外伤性骨折、风湿性或骨性关节炎患者、临床或x一线有明确骨质疏松患者除外。1．2尿DPD的测定患者无需禁食，取晨尿5ml置试管中于一20℃避光保存待检。尿DPD的测定采用全自动化学发光免疫分析仪进行，仪器为美国拜耳公司生产的AcS：l舳型，试剂盒也由该公司提供。尿肌酐(cr)测定采用日本mlymp岫全自动生化分析仪(Aul000)。为避免尿DPD浓度因尿量变化而影响。DPD测定结果采用尿肌酐校正。用DPD／Cr表示，单位砌oL／咖础。1．3统计学处理结果统计分析采用I检验。
2结果结果见表1。1核医学科2肿瘤科A摹金项目：徐州市科技局徐科计[2006]136号朱辉1王淑芹1襄l150倒各类肿瘤患者的临床特点裹2各类肿瘤患者骨转移阳性和阴性毫者尿DPD／Cr水平比较Ii±I)A肿瘤骨转移阳性组与阴性组比较△P 其中各类肿瘤分别为肺癌67例、乳腺癌43例、前列腺癌19例、食管癌5例、胃癌5例、肝癌3例及其它肿瘤8例，在这些肿瘤中有骨转移者68例，没有骨转移者82例(表1)。
2．2尿DPD／cr在肿瘤骨转移阳性组(13．32±8．93)nmol／皿nol显著高于骨转移阴性组(8．80士5．12)衄oL／咖ol(P<0．05)肿瘤骨转移阴性组尿DPD／cr显著高于正常对照组(6．42±3．11)衄oL／衄ol(P12咖彬咖谳，通过12个月的观察，其中7例(54％)巳经发展成为骨转移。
本文《ＴｒＩＦＡ检测ＨＢＶ标志物与病毒载量的关系及临床意义》 --- 作者： 郑红波， 王祥德， 朱训高 |
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